domingo, 16 de octubre de 2011

Practicas de laboratorio

                                                                     

              CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO
Industrial y de servicios no.199
 “Técnicas Banco de Sangre”


“V.D.R.L.”

            La sífilis es una enfermedad venérea causada por Treponema pallidum, espiroqueta estrechamente enrollada, de unos 8 a 15um de largo. La enfermedad sin tratar pasa por tres etapas que se pueden prolongar durante muchos años.
            La sífilis pocas veces se diagnostica mediante la demostración de organismos en una lesión primaria o secundaria. La fase terciaria que sobreviene después, es el resultado de la hipersensibilidad tisular de los antígenos treponémicos, no de la presencia de importantes microorganismos viables. Las pruebas serológicas son importantes para la demostración del Treponema pallidum, cuyo diagnóstico bacteriológico es muy difícil.
            La infección treponémica provoca el desarrollo de anticuerpos IgG o IgM que reaccionan con un antígeno complejo lípídico llamado cardiolipina. Esta actividad anticardiolipídica recibe el a veces el nombre de  reagina.
Los tipos más importantes de pruebas para el diangnóstico de la sífilis son:
prueba de floculación o aglutinación,  prueba de fluorescencia de anticuerpos (FTA), y  pruebas de hemaglutinación.

MATERIAL Y EQUIPO NECESARIO
Placa cóncava (Indispensable)
Agitador mecánico
Cronómetro
Microscopio

REACTIVOS.
1)     Antígeno VDRL (frasco con 5mL) en solución alcohólica que contiene 0.03% de cardiolipina, 0.9% de colesterol y lecitina purificada.
2)     Solución salina regulada pH 6.0  +/- 0.1. 1 frasco con 60mL.
3)     Aguja hipodérmica No. 10 ó 18 sin bisel (se incluye en el equipo)

MUESTRA.
Emplear suero o plasma sin inactivar.  No emplear muestras hemolizadas, contaminadas o lipémicas.  Si el análisis no se va a realizar en el momento, se pueden conservar las muestras a – 20 ° C durante un máximo de 4-6 semanas.

MÉTODO CUALITATIVO
En un anillo de una placa cóncava añada 0.05 mL de suero problema
1. En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otro por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie del anillo.
2.  Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado previamente resuspendido, en cada una de las muestras utilizando la aguja No. 21 sin bisel.
3. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm DURANTE 4 MINUTOS. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras, por tanto, la placa en rotación puede ser cubierta con una tapa de caja petri humedecida previamente con una gasa.
4. Leer inmediatamente al microscopio con Objetivo y Ocular 10 X.

Interpretación
Control Positivo: Presencia de  floculación mediana agrande.
Control  Negativo: Ausencia de floculación.

MÉTODO CUANTITATIVO
1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
2. Colocar  en una gradilla 6  tubos de 12 x 75 mm y numerarlos.
3. Agregar a cada uno 0.5 mL de solución salina 0.9%.
4. Depositar 0.5 ml de suero, al tubo No. 1 y mezclar.
5. Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2  mezclar.
6. Pasar 0.5 mL del tubo No. 2 al tubo No. 3  mezclar.
7. Continuar  esta operación hasta el tubo No. 6.
8. Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones sobre os diferentes anillos de la placa cóncava.
9.  Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No. 21 sin bisel  cada una de las diluciones.
10.Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 minutos.
11. Leer al microscopio con Objetivo y Ocular 10 Interpretación l título del suero problema será la última dilución represente un resultado positivo.  Ejemplo :Si se presenta floculación hasta el tubo No. 3, ésta es la dilución 1:8 y, por tanto, el título será 1:8.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.
A)    Agregados grandes y medianos                       - Suero positivo.
B)    Agregados finos y dispersos                            - Suero débilmente positivo.
C)    No se observan agregados                               - Suero no positivo.
Se pueden producir falsas reacciones positivas en individuos con cuadros patológicos diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, asma, lepra, malaria, tuberculosis, cancer, diabetes y enfermedades autoinmunes.
Un resultado fuertemente positivo en la prueba cualitativa demuestra simplemente la presencia de anticuerpos por lo que, para indicar el grado de reactividad, evaluación de una infección reciente o la respuesta a la terapia, es recomendable efectuar la prueba cuantitativa que a continuación mencionaremos.
RESULTADOS:
*Paciente: Mariana Itzel Camargo García.   SUERO NEGATIVO
NOTA: Solamente se realizo el método cualitativo.










“ROSA DE BENGALA”

Objetivo
Determinar mediante la prueba de rosa de bangala la prescencia de anticuerpos producidos por la reacción inmunológica provocada por alguno de los diferentes tipos de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis)

Fundamento
Se conoce con el término brucelosis al conjunto de enfermedades ocasionadas, tanto en el hombre como en los animales (zoonosis) por microorganismos del géneroBrucella. Incluye, por consiguiente, tanto las diferentes formas clínicas de la infección humana como los diversos cuadros que se presentan en el ganado, sobre todo en forma de abortos epizoóticos. La expresión "brucelosis humana", es más correcta que las denominaciones "fiebre ondulante" o "fiebre de Malta", que hacen referencia a una de sus características clínicas o a una localización geográfica, respectivamente. Desde el punto de vista médico, sanitario y económico, la brucelosis representa un problema de primer orden, fundamentalmente en España, donde es todavía endémica, suponiendo costes económicos muy elevados.
Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas específicas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnóstico temprano.


Reactivos, Material y Equipo

Antígeno Rosa de Bengala
Control Positivo de Brucella
Control Negativo de Brucella

Pipeta desechable
Placa de Prueba

Método
  1. En un espacio de una placa colocar 30 µl de suero problema y 30 µl de antígeno (utilizar pipeta desechable)
  2. Mezclar perfectamente con un aplicador (Usar uno diferente para cada muestra)
  3. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos
  4. Incluir control positivo y negativo
 

Interpretación de resultados
Cualquier tipo de aglutinación = Positivo
Ausencia de aglutinación       = Negativo
 
RESULTADOS:
*Paciente: María Guadalupe Calva Pérez.  NEGATIVO.

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